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    Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)
    組份濃度 100 mg/ml Ampicillin
    配制量  50 ml
    配制方法
    1.  稱量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 離心管中。
    2.加入 40 ml 滅菌水,充分混合溶解后,定容至 50 ml。
    3. 用 0.22 µm 過濾膜過濾除菌。
    4.小份分裝(1 ml/份)后,-20℃保存。

    IPTG(異丙基-β -D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)
    組份濃度 24 mg/mL IPTG
    配制量 50 mL
    配制方法
    1.稱 1.2 g IPTG 置于 50 ml 離心管中。
    2.加入 40 ml 滅菌水,充分混合溶解后,定容至 50 ml。
    3.用 0.22 µm 過濾膜過濾除菌。
    4.小份分裝(1 ml,份)后,-20℃保存。 

    X-Gal (20 mg/ml)
    組份濃度  20 mg/ml X-Gal
    配制量 50 ml
    配制方法
    1. 稱量 l g X-Gal 置于 50 ml 離心管中。
    2.加入 40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至 50 ml。
    3.小份分裝(1 ml/份)后,-20℃避光保存。

    LB 培養基
    組份濃度 1%(W/V)Tryptone( 胰 蛋 白 胨 ) , 0.5%(W/V)Yeast Extract( 酵 母 提 取 物 ) ,1%(W/V)NaCl
    配制量 1L
    配制方法
    1. 稱取下列試劑,置于 l L 燒杯中。 Tryptone 10 g;Yeast Extract 5g;NaCl   10 g
    2. 加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    3.滴加 5 N NaOH(約 0.2 m1),調節 pH 值至 7.0。
    4.加去離子水將培養基定容至 1 L。
    5.高溫高壓滅菌后,4℃ 保存。

    LB/Amp 培養基
    組份濃度 1%(W/V)  Tryptone;0.5%(W/V)  Yeast Extract;1%(W/V) NaCl;0.1 mg/ml Ampicillin
    配制量  1L
    配制方法
    1. 稱取下列試劑,置于 l L 燒杯中。Tryptone 10 g;Yeast Extract 5g;NaCl  10 g
    2.加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    3.滴加 5 N NaOH(約 0.2 mL)。調節 pH 值至 7.0。
    4.加去離子水將培養基定容至 1 L。
    5.高溫高壓滅菌后,冷卻至室溫。
    6.加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均勻混合。
    7.4℃保存。

    TB 培養基
    組份濃度 1.2%(W/V) Tryptone;2.4%(W/V)Yeast Extract; 0.4%(V/V) Glycerol; 17mM KH2PO4;72mM  K2HPO4
    配制量 1L
    配制方法
    1.配制磷酸鹽緩;中液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。
    溶解 2.31 g KH2PO4 和 l2.54 g K2HPO4 于 90 ml 的去離子水中, 攪拌溶解后, 加去離子水定容至 100 ml,高溫高壓滅菌。
    2. 稱取下列試劑,置于 l L 燒杯中。 Tryptone 12 g;Yeast Extract 24 g ; Glycerol  4ml
    3.加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    4.加去離子水將培養基定容至 1 L 后,高溫高壓滅菌。
    5.待溶液冷卻至 60℃以下時,加入 100 ml 的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。
    6.4℃保存。

    TB/Amp 培養基
    組份濃度 1.2%(W/V)  Tryptone ;2.4%(W/V) Yeast Extract;0.4%(V/V)Glycerol ; 17 mM KH2PO4;72 mM K2HPO4;0.1 mg/ml Ampicillin
    配制量 1L  
    配制方法
    1.配制磷酸鹽緩沖液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。
    溶解 2.31 g KH2PO4,和 12.54g K2HPO4 于 90 ml 的去離子水中, 攪拌溶解后, 加去 離子水定容至 100 ml,高溫高壓滅菌。
    2. 稱取下列試劑,置于 l L 燒杯中。 Tryptone 12 g;Yeast Extract 24 g;Glycerol  4 ml
    3.加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    4.加去離子水將培養基定容至 l L 后,高溫高壓滅菌。
    5.待溶液冷卻至 60℃以下時, 加入 100 ml 的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和1ml的Ampicillin( 100mg/ml )。
    6.均勻混合后 4℃保存。

    SOB 培養基
    組份濃度 2%(W/V) Tryptone;0.5%(W/V)Yeast Extract; 0.05%(W/V)NaCl ; 2.5mM KCl ;10 mM MgCl2
    配制量  1L   
    配制方法
    1. 配制 250 mM KCl 溶液。
    在 90 ml 的去離子水中溶解 l.86 g KCl 后,定容至 100 ml。
    2. 配制 2 M MgCl2 溶液。
    在 90 ml 去離子水中溶解 19 g MgCl2 后,定容至 100 ml,高溫高壓滅菌。
    3. 稱取下列試劑,置于 l L 燒杯中。
    Tryptone 20 g;Yeast Extract 5g;NaCl   0.5 g
    4.加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    5.量取 10 m1 250 mM KCl 溶液,加入到燒杯中。 滴
    6.加 5 N NaOH 溶液(約 0.2 m1),調節 pH 值至 7.0。
    7.加入去離子水將培養基定容至 l L。
    8.高溫高壓滅菌后,4℃保存。
    9.使用前加入 5 ml 滅菌的 2 M MgCl2 溶液。

    SOC 培養基
    組份濃度 2%(W/V) Tryptone;0.5%(W/V)Yeast Extract; 0.05%(W/V)NaCl ; 2.5mM KCl ;10 mM MgCl2;20 mM  Glucose(葡萄糖)
    配制量 1L
    配制方法
    1. 配制 l M Glucose 溶液。
    將 18 g Glucose 溶于 90 ml 去離子水中, 充分溶解后定容至 100 ml。 用 0.22 濾膜過濾除菌。
    2.向 l 00 ml SOB 培養基中加入除菌的 1 M Glucose 溶液 2 ml,均勻混合。
    3.4℃保存。

    2× YT 培養基
    組份濃度 1.6%(WV)Tryptone,1%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)NaCl
    配制量 1L
    配制方法
    1. 稱取下列試劑,置于 l L 燒杯中。
    Tryptone 16 g;Yeast Extract  10 g;NaCl  5g
    2.加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    3.滴加 5 N NaOH,調節 pH 值至 7.0。
    4.加去離子水將培養基定容至 1 L。
    5.高溫高壓滅菌后,4℃保存。

    Фb×broth
    組份濃度  2%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,o 5%(W/V)MgSO4· 7H2O
    配制量  l L
    配制方法
    1. 稱取下列試劑,置于 l L 燒杯中。 Tryptone 20 g;Yeast Extract 5g;MgSO4· 7H2O 5g
    2.加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    3.滴加 1 N KOH。調節 pH 值至 7.5。
    4.加去離子水將培養基定容至 1 L。
    5.高溫高壓滅菌后,4℃保存。

    NZCYM 培養基
    組份濃度 0.5%(WV) Yeast Extract;0.1%(WV) Casamino Acid; 1%(WV) NZ 胺;0.5%(WV)  NaCl;0.2%(WV) MgSO4· 7H2O
    配制量 1L
    配制方法
    1. 稱取下列試劑。置于 l L 燒杯中。  Yeast Extract 5g; Casamino Acid(酪蛋白氨基酸)1g;NZ 胺 10 g;NaCl  5g; MgSO4· 7HO  2g
    2.加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    3.滴加 5 N NaOH(約 0.2 m1),調節 pH 值至 7.0。
    4.加去離子水將培養基定容至 1 L。
    5.高溫高壓滅菌后,4℃保存。

    NZYM 培養基
    組份濃度 0.5%(WV)Yeast Extract ;1%(WV) NZ 胺;0.1%(WV) NaCl ;0.2%(WV)  MgSO4· 7H2O
    配制方法 NZYM 培養基除不含 Casamino Acid 外,其他成份與 NZCYM 培養基相同。

    NZM 培養基
    組份濃度 1%(WV) NZ 胺 ;0.1%(WV) NaCl ;0.2%(WV) MgSO4· 7H2O
    配制方法:NZM 培養基除不含 Yeast Extract(酵母提取物)外,其他成份與 NZYM 培養基相 同。

    一般固體培養基的配制
    配制方法
    1. 按照液體培養基配方準備好液體培養基,在高溫高壓滅菌前,加入下列 試劑中的一種。
     Agar(瓊脂;鋪制平板用) 15 g/L;Agar(瓊脂;配制頂層瓊脂用) 7 g/L;Agarose(瓊脂糖;鋪制平板用)15 g/L ;Agarose(瓊脂糖;配制頂層瓊脂用) 7 g/L
    2.高溫高壓滅菌后, 戴上手套取出培養基, 搖動容器使瓊脂或瓊脂糖充分混勻(此 時培養基溫度很高,小心燙傷)。
    3.待培養基冷卻至 50~60℃時,加入熱不穩定物質(如抗生素等),搖動容器充分 混勻。
    4.鋪制平板(30~35 ml 培養基/90 mm 培養皿)。

    LB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培養基
    組份濃度 1%(W/V)Tryptone; 0.5%(W/V) Yeast Extract;1%(W/V)   NaCl;0.1 mg/ml Ampicillin ;0.024mg/ml IPTG;0.04 mg/ml X-GaL; 1.5%(W/V) Agar
    配制量  l L
    配制方法
    1. 稱取下列試劑,置于 l L 燒杯中。 
    Tryptone 10 g ; Yeast Extract 5g ;NaCl 10 g
    2.加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    3.滴加 5 N NaOH(約 0.2 mL),調節 pH 值至 7.0。
    4.加去離子水將培養基定容至 1 L 后,加入 15 g Agar。
    5.高溫高壓滅菌后,冷卻至 60℃左右。
    6.加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml)、1 ml IPTG(24 mg/ml)、2 ml X-Gal(20 mg/mL) 后均勻混合。
    7.鋪制平板(30~35 ml 培養基/90 mm 培養皿)。
    8.4℃避光保存。

    TB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培養基
    組份濃度 1.2%(W/V) Tryptone ;2.4%(W/V) Yeast Extract;0.4%(V/V) Glycerol;17 mM KH2PO4;72 mM K2HPO4;0.1 mg/ml Ampicillin ;0.024 mg/ml  IPTG ;0.04mg/mL X-GaL;1.5%(W/V) Agar
    配制量  1L 
    配制方法
    1. 配制磷酸鹽緩沖液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。  
    溶解 2.31 g KH2PO4 和 12.54 g K2HPO4 于 90 ml 的去離子水中,攪拌溶解后,加 去離子水定容至 100 ml,高溫高壓滅菌。
    2. 稱取下列試劑,置于 l L 燒杯中。 Tryptone 12 g ;Yeast Extract 24 g;Glycerol 4 ml
    3.加入約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。
    4.加去離子水將培養基定容至 1 L 后。加入 l 5 g Agar。
    5.高溫高壓滅菌后,冷卻至 60℃左右。
    6.加入 100 ml 的上述滅菌磷酸鹽緩沖液、 l ml Ampicillin (100mg/ml)、1 ml IPTG(24mg/mL)、2 ml X-Gal(20 mg/ml)后均勻混合。
    7.鋪制平板(30~35 ml 培養基/90 mm 培養皿)。
    8.4℃避光保存。

     

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