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    1 M Tris-HCl (pH7.4,7.6,8.0)
    組份濃度  1 M Tris-HCl
    配制量    1L
    配制方法 
                1.稱量121.1 g Tris置于l L燒杯中。
                2.加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。
                3.按下表加入濃HCl量調節所需要的pH值。
    pH值    濃HCl
    7.4    約70 ml
    7.6    約60 ml
    8.0    約42ml
               4.將溶液定容至1 L。
               5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
    注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高l℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。

    1.5 M Tris-HCl (pH8.8)         
    組份濃度  1.5 MTris-HCl
    配制量    1 L
    配制方法 
                1.稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。
                2.加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。
                3.用濃HCl調節pH值至8.8。
                4.將溶液定容至1 L。
                5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
    注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高l℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。

    1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6,8.0)       
    組份濃度  100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA
    配制量    1 L
    配制方法 
                 1.量取下列溶液,置于l L燒杯中。
    1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0)    100 ml;500 mM EDTA(pH8.0)    20 ml
                2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水,均勻混合。
                3.將溶液定容至1 L后,高溫高壓滅菌。
                4.室溫保存。

    3 M醋酸鈉(pH5.2)           
    組份濃度  3 M醋酸鈉
    配制量    100 ml
    配制方法 
                1.稱量40.8 g NaOAc•3H2O置于100~200 ml燒杯中,加入約40 ml的去離子水攪拌溶解。
                2.加入冰醋酸調節pH值至5.2。
                3.加去離子水將溶液定容至100 ml。
                4.高溫高壓滅菌后,室溫保存。

    PBS Buffer           
    組份濃度  137 mM NaCl,2.7 mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4
    配制量    1 L
    配制方法 
                 1.稱量下列試劑,置于l L燒杯中。
    NaCl  8 g;KCl     0.2 g;Na2HPO4    1.42 g;KH2PO4    0.27 g
                2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。
                3.滴加濃HCl將pH值調節至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1 L。
                4.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
    注意:上述PBS Buffer中無二價陽離子,如需要,可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

    10 M醋酸銨   
    組份濃度  10 M醋酸銨
    配制量    100 ml
    配制方法 
                1.稱量77.1 g醋酸銨置于100~200 ml燒杯中,加入約30 ml的去離子水攪拌溶解。
                2.加去離子水將溶液定容至100 ml。
                3.使用0.22 µm濾膜過濾除菌。
                4.密封瓶,室溫保存。
    注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。

    Tris-HCl平衡苯酚   
    配制方法
              1.使用原料:大多數市售液化苯酚是清亮無色的,無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色,應避免使用。同時也應避免使用結晶苯酚,結晶苯酚必須,160℃對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產物,這些氧化產物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或導致RNA和DNA的交聯等。因此,苯酚的質量對DNA、RNA的提取極為重要,我們推薦使用高質量的苯酚進行分子生物學實驗。
              2.操作注意:苯酚腐蝕性極強,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行,與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。
                3.苯酚平衡:因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相,因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
                ①液化苯酚應貯存于-20℃,此時的苯酚呈結晶狀態。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
                ②加入羥基喹啉(8-Qulnollnol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,同時因其呈黃色,有助于方便識別有機相。
                ③加入等體積的1 M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌l5min,靜置使其充分分層后,除去上層水相。
                ④重復操作步驟③。
                ⑤加入等體積的0.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力攪拌器攪拌l5min,靜置使其充分分層后,除去上層水相。
                ⑥重復操作步驟⑤,稍微殘留部分上層水相。
                ⑦使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。
                ⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

     

    苯酚/氯仿/異戊醇 (25 : 24 : 1)
    配制方法:
               1. 說明:從核酸樣品中除去蛋白質時常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質變性并有助于液相與有機相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現的氣泡。
               2. 配制方法:將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24 : 1)混合均勻后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

    10% (W/V) SDS
    組份濃度:10% (W/V)SDS
    配制量:100ml
    配制方法:
              1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中,加入約80ml的去離子水,68℃加入溶解
              2.滴加濃鹽酸調節pH值至7.2
              3.將溶液定容至100ml后,室溫保存。

    2 N NaOH
    組份濃度:2 N NaOH
    配制量:100 ml
    配制方法:
              1. 量取80 ml去離子水置于100~200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。
              2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。
              3. 待NaOH完全溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100 ml。
              4. 將溶液轉移至塑料容器中后,室溫保存。
     
    2.5 N HCl
    組份濃度:2.5 N HCl
    配制量:100 ml
    配制方法:
             1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸(11.6 N),均勻混合。
             2. 室溫保存。
     
    5 M NaCl
    組份濃度:5 M NaCl
    配制量:1 L
    配制方法:
             1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中,加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。
             2. 加去離子水將溶液定容至1 L后,適量分成小份。
             3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
     
    20% (W/V) Glucose
    組份濃度:20% (W/V) Glucose
    配制量:100 ml
    配制方法:
             1. 稱取20 g Glucose置于100~200 ml燒杯中,加入約80 ml的去離子水后,攪拌溶解。
             2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
             3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
     
    Solution I(質粒提取用)
    組份濃度:25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
    配制量:1 L
    配制方法:
             1. 量取下列溶液,置于1 L燒杯中。
             2. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
             3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。
     
    Solution II(質粒提取用)
    組份濃度:200mM NaOH,1%(W/V)SDS
    配制量:500ml
    配制方法:
              1.量取下列溶液,置于500ml燒杯中
               10% SD 50ml;2N NaOH50ml
              2.加滅菌水定容至500ml,充分混勻
             3.室溫保存,此溶液保存時間最好不要超過一個月
    注意:SDS易產生氣泡,不要劇烈攪拌
     
    Solution III(質粒提取用)
    組份濃度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH
    配制量:500 ml
    配制方法:
             1. 稱量下列試劑,置于500 ml燒杯中。
             2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。
             3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。
             4. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
     
    0.5 M EDTA(pH8.0)
    組份濃度:0.5 M EDTA
    配制量:1 L
    配制方法:
            1. 稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L燒杯中。
            2. 加入約800 ml的去離子水,充分攪拌。
            3. 用NaOH調節pH值至8.0(約20 g NaOH)。
               注意:pH值至8.0時,EDTA才能完全溶解。
           4. 加去離子水將溶液定容至1 L。
           5. 適量分成小份后,高溫高壓滅菌。
           6. 室溫保存。
     
    1 M DTT
    組份濃度:1 M DTT
    配制量:20 ml
    配制方法:
             1. 稱取3.09 g DTT,加入到50 ml塑料離心管內。
             2. 加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22 mm濾器過濾除菌。
            3. 適量分成小份后,-20℃保存。
     
    10 mM ATP
    組份濃度:10 mM ATP
    配制量:20 ml
    配制方法:
            1. 稱取121 mg Na2ATmiddot;3H2O,加入到50 ml塑料離心管內。
            2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。
            3. 適量分成小份后,-20℃保存。

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