Zeocin是腐草霉素D1（Phleomycin D1）的商業名稱，其中文名稱博來霉素是一種銅離子螯合的糖肽抗生素（來源于鏈霉菌Streptomyces verticillus的突變株），銅離子的存在使其呈藍色，此銅螯合的形式為無活性。

當抗生素進入細胞后，二價銅離子（Cu2+）被還原為一價銅離子（Cu+），并被細胞內的巰基化合物去除。銅離子被去除后，Zeocin被活化，嵌入DNA使其斷裂，最終導致細胞死亡。

博來霉素是作用譜廣泛，對細菌、真核微生物、植物和哺乳動物細胞具很強的毒性。博來霉素常用作一種非常有效的工具抗生素，用來篩選攜帶Sh ble抗性基因并能穩定表達分子量為13.665 kDa的一種博來霉素抗性蛋白的細胞株。博來霉素是的用量為 50-2000 ug/ml（通常 300 ug/ml），具體取決于細胞類型。

 

注意：我司產品為非無菌包裝，若用于細胞培養，請提前做預處理，除去熱原細菌，否則會導致染菌。

 

應用參考濃度：

1）大腸桿菌篩選：25-50μg/mL（低鹽LB培養基，NaCl濃度不能超過5g/L） 

2）酵母菌篩選：50-300μg/mL（YPD或基本培養基） 

3）哺乳動物細胞篩選：50-1000μg/mL（合適培養基，根據細胞系而不同）

使用步驟參考:

一、細胞對Zeocin敏感性的確定（殺滅曲線建立）

重新鋪板或者將滿盤細胞重新分盤，使得細胞密度約25%，按照8個平板/組準備，培養24h，去除舊培養基。 

加入含不同濃度Zeocin的篩選培養基，Zeocin濃度可設置為0, 50, 100, 200, 400, 600, 800和

1000 μg/ml，每個濃度做3個平行；也可根據自身實驗體系，設置不同的濃度梯度。

 

每3-4天更換新鮮的篩選培養基，并觀察存活細胞的比例。

選擇在合適時間（1-2周內）殺死大多數細胞的濃度為最加工作濃度。

【注】：若是難以在顯微觀察下區分活細胞，建議使用臺盼藍染色來計算存活細胞的數量，以確定Zeocin的最適濃度。

二、篩選穩定轉染細胞系

轉染細胞，用100mm培養皿進行培養。以未轉染的細胞作為陰性對照。 

轉染后，用預熱的1X PBS洗滌一次，加入新鮮培養基。 

轉染48-72h后，用含有最加濃度Zeocin（由滅殺曲線確定）的新鮮培養基篩選細胞。

為了更好的鑒定和篩選細胞集落，建議將細胞按比例稀釋成一系列濃度。 

【注】：若待篩選細胞對Zeocin的抗性明顯強于大部分細胞，按照以下方法克服此類耐性：

用含Zeocin培養基進行細胞分盤，置于37°C孵育2-3h，使得細胞貼壁。

然后將細胞置于4°C，2h。記得使用Hepes作為培養基的緩沖體系。

重新將細胞置于37°C孵育。

4°C孵育細胞的目的是短時間內終止細胞分化，使得Zeocin能發揮作用，殺死細胞。

每3-4天更換新鮮的選擇培養基，直到出現細胞集落。 

挑選并轉移克隆到96或48孔板中。在進行更大孔徑培養板或培養皿上擴大培養之前，確保培養細胞密度近100%。

三、穩定轉染細胞系的維持培養:

可采取以下方式維持培養穩定轉染細胞： 

1）使用含相同劑量Zeocin的篩選培養基來維持培養； 

2）降低Zeocin劑量為原來的一半進行維持培養； 

3）使用正好能預防敏感細胞生長但不足以致死的Zeocin劑量來維持培養【根據殺滅曲線來判斷】。

 

 

 

1.  

使用:
●液體Zeocin可用于細胞培養。 
●用于篩選轉化株的Zeocin濃度根據pH值和鹽濃度改變。 
●pH越高，鹽濃度越低Zeocin活性越大。 
●普通大腸桿菌菌株篩選可在25＆micro；g／ml zeocin濃度的低鹽LB瓊脂培養基中進行，pH調至7.5。 
●動物細胞篩選：根據不同細胞系從100到750＆micro；g／ml。 
●植物細胞篩選：根據不同的細胞種類和培養基從50到250＆micro；g／ml。 
●酵母篩選：取決于種屬和培養基，S。cerevisiaeSh ble轉化株在50＆micro；g／ml濃度的YPD培養基中篩選

 

常用的科研用途抗生素

我公司提供一系列常用的科研用途抗生素，現貨供應，可提供大包裝，滿足用戶多重需求

1、作用機理：干擾細胞膜合成（Cell Membrane Syntesis）

產品名稱	貨號	CAS	作用機理
達托霉素(Daptomycin)		103060-53-3	與細胞質膜結合，通過與其相互作用引起構象變化，破壞質膜功能。
硫酸多粘菌素B（Polymyxin B Sulphate）	P019	1405-20-5	與細菌脂多糖的脂質A部分結合，誘導膜孔形成，干擾質膜通透性。
硫酸粘桿菌素 Colistin Sulfate (Polymyxin E)	C018	1264-72-8	與革蘭氏陰性菌質膜的脂質結合，從而破壞細胞膜完整性

 

2、作用機理：干擾細胞壁合成（Cell Wall Syntesis interference）

產品名稱	貨號	CAS	作用機理	主要應用
氨芐青霉素鈉，Ampicillin, Sodium Salt	A010	69-52-3	β-內酰胺類抗生素，促使細菌細胞膜內層的轉肽酶失活，從而抑制細菌細胞壁合成	分子生物學篩選抗生素
羧芐青霉素二鈉鹽，Carbenicillin, Disodium Salt	C002	4800-94-6	β-內酰胺類抗生素，促使細菌細胞膜內層的轉肽酶失活，從而抑制細菌細胞壁合成	分子生物學篩選抗生素
噻孢霉素鈉，Cefotaxime Sodium Salt	C003	64485-93-4	通過與青霉素結合蛋白（PBPs）結合來阻止肽聚糖合成過程中zui后一步轉肽的發生，進而抑制細胞壁合成	植物培養抑制農桿菌污染
頭孢西丁鈉，Cefoxitin Sodium Salt		33564-30-6	第二代頭孢菌素類抗生素，通過抑制細菌細胞壁合成來殺滅細菌。
Bacitracin桿菌肽		1405-87-4	多肽抗生素，通過抑制脂質焦磷酸去磷酸化，來抑制細菌細胞壁合成
青霉素G鈉鹽，Penicillin G, Sodium Salt	P013	69-57-8	β-內酰胺類抗生素，促使細菌細胞膜內層的轉肽酶失活，從而抑制細菌細胞壁合成	防止真核細胞培養污染
鹽酸萬古霉素，Vancomycin Hydrochloride	V002	1404-93-9	糖肽類抗生素，干擾細胞壁合成

 

3、作用機理：干擾或抑制蛋白合成（Protein Syntesis interference or inhibition）

產品名稱	貨號	CAS	作用機理	主要應用
硫酸安普霉素（阿布拉霉素），Apramycin Sulfate	A011	65710-07-8	氨基糖苷類抗生素，通過阻斷轉位來抑制蛋白合成
Blasticidin S  殺稻瘟菌素S（滅瘟素）	B005	3513-03-9	核苷肽類抗生素，主要通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核細胞的蛋白質合成。	細胞生物學，篩選抗生素
Chloramphenicol 氯霉素	C007	56-75-7	抑制50S核糖體亞基轉肽酶步驟的翻譯過程
Doxycycline Hyclate  鹽酸強力霉素	D041	24390-14-5	與30S核糖體亞基結合，干擾tRNA/mRNA相互作用，zui終抑制蛋白合成。	Tet-on/Tet-off系統效應物
硫酸慶大霉素，Gentamycin Sulfate Salt	G005	1405-41-0	與30S核糖體亞基結合導致密碼子錯讀，阻斷肽酰-tRNA從受體位到供體位的轉位，進而抑制細菌蛋白質的合成。
硫酸卡那霉素，Kanamycin Sulfate	K001	25389-94-0	氨基糖苷類抗生素，與70S核糖體亞基結合來抑制轉位和誘發密碼錯編	分子生物學篩選抗生素
Erythromycin 紅霉素	E003	114-07-8	大環內酯類抗生素，結合與50S核糖體亞基，阻斷新生多肽鏈的延伸，從而抑制細菌蛋白質合成。
Roxithromycin 羅紅霉素	R007	80214-83-1	與細菌核糖體50S亞基結合，抑制多肽轉位，進而阻斷蛋白質合成。
鹽酸四環素，Tetracycline Hydrochloride	T009	64-75-5	穿透細胞膜上的質子通道，進入細胞后與30S核糖體結合，通過阻止氨基酰-tRNA轉移到mRNA-核糖體復合物上的受體部位（A部位），從而抑制蛋白質的合成	分子生物學篩選抗生素
Neomycin Sulfate 硫酸新霉素	N005	1405-10-3	與引起錯編的 30S 和 50S（有時為 50S）亞基結合；抑制蛋白質合成的開始和延長。	細胞生物學篩選抗生素
嘌呤霉素鹽酸鹽，Puromycin Dihydrochloride	P012	58-58-2	氨基糖苷類抗生素，作為氨酰-tRNA分子3’末端的結構類似物，能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸肽鏈中，導致肽鏈合成的*終止，進而阻止蛋白質合成。	細胞生物學篩選抗生素
鹽酸壯觀霉素，Spectinomycin Dihydrochloride	S005	22189-32-8	與細菌核糖體30S亞基結合，干擾肽酰tRNA轉位從而抑制蛋白質合成（延伸）	植物細胞研究篩選抗生素
硫酸鏈霉素，Streptomycin Sulfate	S007	3810-74-0	氨基糖苷類抗生素，與30S核糖體亞基上的S12蛋白結合，導致mRNA序列錯讀和轉位抑制，進而抑制細菌蛋白質合成。	防止真核細胞培養污染
Thiostrepton 硫鏈絲菌素		1393-48-2	多肽抗生素，防止延伸因子G和 GTP結合到50S核糖體亞基

 

4、作用機理：結合麥角甾醇或抑制生物合成的抗真菌劑（Antifungals that binds ergosterol or inhibit biosynthesis）

產品名稱	貨號	CAS	作用機理	主要應用
兩性霉素B，Amphotericin B	A009	1397-89-3	多烯類抗真菌抗生素，結合真菌細胞膜上的固醇、主要為麥角甾醇。在膜上形成孔道，導致小分子泄露。	抗真菌劑，防止真核細胞培養污染
Fluconazole 氟康唑		86386-73-4	干擾真菌麥角甾醇合成和下調金屬硫蛋白基因。
Nystatin 制霉菌素		1400-61-9	通過與甾醇結合提高敏感真菌的細胞膜通透性。

 

5、作用機理：干擾DNA、RNA或蛋白合成（Interferes with DNA, RNA, or Protein Synthesis）

產品名稱	貨號	CAS	作用機理	主要應用
Cordycepin 蟲草素		73-03-0	轉化為蟲草素5’-三磷酸，通過poly（A）聚合酶插入核酸，由于缺乏3’-OH導致鏈合成終止。
鹽酸環丙沙星，Ciprofloxacin Hydrochloride		86393-32-0	氟喹諾酮抗菌素，靶向DNA促旋酶和拓撲異構酶來抑制DNA解鏈。	防止支原體污染
Enrofloxacin 恩諾沙星		93106-60-6	喹諾酮羧酸衍生物，抑制DNA促旋酶活性。
Hygromycin B 潮霉素B	H004	31282-04-9	阻斷多肽合成和抑制延伸。	細胞生物學，篩選抗生素
Nalidixic Acid 萘啶酸		389-08-2	喹諾酮類抗生素，抑制或調節細菌DNA促旋酶依賴的過程比如DNA聚合，ATP依賴的DNA超螺旋和染色體片段化。
新生霉素鈉鹽，Novobiocin Sodium Salt	N008	1476-53-5	氨基香豆素類抗生素，通過競爭性抑制原核DNA促旋酶和真核DNA拓撲異構酶活性來阻斷DNA合成，zui終導致細胞死亡。
腐草霉素，Phleomycin		11006-33-0	阻斷細胞進入S周期	細胞生物學，篩選抗生素
硫酸巴龍霉素，Paromomycin Sulfate		1263-89-4	通過與16S rRNA結合，抑制蛋白合成中的起始和延伸步驟	植物轉化篩選抗生素
Rifampicin 利福平	R004	13292-46-1	靶向結合DNA依賴性的RNA聚合酶β-亞基，從而抑制RNA合成的開始	植物轉化篩選抗生素

 

6、其他抗真菌化合物（Additional Antifungal Compounds）

 

產品名稱	貨號	CAS	作用機理	主要應用
Anisomycin 茴香霉素		22862-76-6	通過抑制真核核糖體的多肽轉移酶活性來抑制蛋白合成。
巴佛洛霉素A1，Bafilomycin A1		88899-55-2	動物細胞、植物細胞和微生物V-ATPase特異抑制劑
硫酸諾爾斯菌素，Nourseothricin (NTC) Sulfate		96736-11-7	抗真菌劑，有效抑制白色念珠菌	酵母菌篩選抗生素
Oligomycin 寡霉素	O002	1404-19-9	大環內酯抗生素，抑制線粒體ATPase和磷?；D移。
Tunicamycin 衣霉素	T019	11089-65-9	抗細菌和抗真菌劑。抑制N-乙?；?1-磷酸轉移酶（GPT）活性，以及防止糖蛋白合成中的N-糖苷連接形成。	抗細菌和抗真菌劑，糖蛋白合成研究